(024) 3553 5355
Điện thoại
irdop.quantri@gmail.com
Email to irdop.quantri@gmail.com

Đăng nhập - Tài khoản

ỨNG DỤNG KĨ THUẬT ELISA PHÂN TÍCH KIỂM NGHIỆM CHẤT KHÁNG SINH ENROFLOXACIN TRONG THỰC PHẨM

(TS. Nguyễn Hữu Nghị, DS Lê Thị Huyền và cộng sự)

ỨNG DỤNG KĨ THUẬT ELISA PHÂN TÍCH KIỂM NGHIỆM CHẤT KHÁNG SINH ENROFLOXACIN TRONG THỰC PHẨM

The overuse of the antibiotic Enrofloxacin in veterinary treatment has led to a residue of this antibiotic in food that exceeds the permitted level. Therefore, this analytical testing needs to be done quickly and accurately. This study aims to apply the Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) technique to quickly detect and quantify Enrofloxacin in food.

  1. Tổng quan về kĩ thuật ELISA

Enrofloxacin là một chất kháng khuẩn tổng hợp thuộc nhóm các dẫn xuất axit carboxylic của fluoroquinolone, có công thức hoá học là C19H22FN3O3. Chất này có hoạt tính kháng khuẩn chống lại phổ rộng các vi khuẩn Gram dương và Gram âm bao gồm hầu hết các loài như Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella, Escherichia coli, Enterobacteria, Campylobacter, Shigella, Salmonella, Aeromonas, Proteus, Yersinia, Serratia, Vibrio, Brucella, Chlamydia, Staphylococci, Mycoplasma và Mycobacterium[1] [2]. Nó được sử dụng để điều trị các bệnh mhiễm trùng trên vật nuôi.

Tuy nhiên lại thuốc này gây kích thích thần kinh trung ương ở người. Việc lạm dụng loại chất kháng sinh này trên vật nuôi đẫn đến lượng tồn dư trong các loại thực phảm có nguồn gốc từ động vật như các loại thịt, sữa vượt quá mức cho phép, gây hại cho con người. Vì vậy cần kiểm nghiệm để kiểm soát các loại thực phẩm này trước đưa ra thị trường.

Áp dụng phương pháp ELISA vào phân tích kiểm nghiệm giúp phát hiện và định lượng Enrofloxacin ở mức ng/ml – pg/ml tồn dư trong thực phẩm một cách nhanh chóng và chính xác[3] [5].  Nguyên lí của phương pháp là sử dụng enzyme để phát hiện sự gắn kết đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng thể. Enzyme sẽ chuyển cơ chất không màu thành sản  có màu, qua đó cho thấy có hiện diện mối liên kết kháng nguyên kháng thể. ELISA có thể sử dụng để phát hiện kháng nguyên hoặc kháng thể trong một mẫu thông qua cường độ màu [3][4].

  1. Quy trình phân tích Enrofloxacin trong sữa bò bằng phương pháp ELISA cạnh tranh trực tiếp

2.1. Nguyên lý:

          Kháng thể đặc hiệu kháng Enrofloxacin được gắn lên giếng. Cho mẫu vào, nếu Enrofloxacin có trong mẫu phân tích sẽ bị kháng thể bắt giữ, các tạp chất bị rửa trôi. Cho thêm cộng hợp giữa Enrofloxacin và enzyme vào giếng, khi đó nồng độ Enrofloxacin sẽ được hiển thị dựa trên mức độ phát quang của mỗi giếng. Nếu nồng độ Enrofloxacin cao tương ứng với màu nhạt, còn nồng độ Enrofloxacin thấp tương ứng với màu đậm[3].

2.2. Các bước tiến hành

Bước 1: Xử lý mẫu

  • Cách 1: Hệ số pha loãng 3 lần

– Cho 2g mẫu vào ống ly tâm, sau đó cho thêm 4ml dung dịch methanol 70% vào

– Lắc mẫu trong 20 phút

– Ly tâm 10000 vòng/phút trong 15 phút

– Lấy 2ml dịch trong, thổi khô, sau đó hòa cặn lại bằng dung dịch methanol 35%. Độ pha loãng: 3 lần

  • Cách 2: Hệ số pha loãng 6 lần

– Cho 2g mẫu vào ống ly tâm, sau đó cho thêm 4ml dung dịch methanol 70% vào

– Lắc mẫu trong 20 phút

– Ly tâm 10000 vòng/phút trong 15 phút

– Rút 1 ml dịch trong pha loãng với 1 ml dung dịch pha loãng đi kèm.

Bước 2: Thực hiện phản ứng.

– Cho 50µl dung dịch chuẩn enrofloxacin và dung dịch mẫu vào mỗi giếng

– Cho 50µl cộng hợp enzyme vào các giếng đã cho chuẩn và mẫu

– Ủ tại nhiệt độ phòng trong 30 phút

– Rửa các giếng bằng dung dịch rửa 3 lần

– Cho 100µl cơ chất hiện màu vào tất cả các giếng, ủ trong 30 phút

– Để đọc mật độ quang bằng máy so màu thì cho vào mỗi giếng 50ml dịch hãm, hỗn hợp sẽ chuyển sang màu vàng, sau đó đọc tại bước sóng 450nm.

Cách đọc như sau:

– Đối chứng dương: Màu rõ ràng, độ hấp thu ánh sáng (A) phải ³ 0.6

– Đối chứng âm: không màu hoặc màu nhạt, độ hấp thu A phải < 0.1

– Mẫu dương tính: Có màu rõ ràng, độ hấp thu A phải ³ 0.

  2.3. Kết quả

Kết quả sẽ được chúng tôi trình bày ở phần tiếp theo.

Tài kiệu tham khảo

[1] PubChem, “Enrofloxacin.” [Online]. Available: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/969516. [Accessed: Nov. 17, 2019)].

[2] The European Agency for the Evaluation of medical products (1998), Committee for veterinary medicinal products enrofloxacin.

[3] ThS. Bùi Quốc Anh (2014), Quy trình phân tích Enrofloxacin trong thực phẩm bằng phương pháp Elisa cạnh tranh trực tiếp, Trung tâm thông tin Khoa học và Công nghệ TP. HCM.

[4] Phan Kim Ngọc, Phạm Văn Phúc (2007), Sách Công nghệ sinh học trên người và động vật, Nhà xuất bản Giáo dục Việt Nam.

[5] Trung tâm Thông tin Khoa học & Công nghệ (2014), Xu hướng công nghệ phân tích dư lượng kháng sinh trong thủy sản và thực phẩm trên cơ sở số liệu sáng chế quốc tế, Trung tâm thông tin Khoa học và Công nghệ TP. HCM.

 

Bài viết liên quan

Liên hệ

176 Phùng Khoang, phường Trung Văn, quận Nam Từ Liêm, T.p Hà Nội
Điện thoại
(024)-3553-5355
Email
irdop.quantri@gmail.com

Dịch vụ

NGHIÊN CỨU KHOA HỌC
Nghiên cứu khoa học
ĐÁNH GIÁ, KIỂM NGHIỆM
Nghiên cứu khoa học
TƯ VẤN, ĐÀO TẠO
Nghiên cứu khoa học

Tài Liệu

Bài báo quốc tế

Bài báo quốc tế

Báo cáo khoa học

Báo cáo khoa học

Nghiên cứu khoa học

Bài báo quốc tế

Liên kết website