Phương pháp: Kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở 44 oC sử dụng môi trường thạch trypton-mật-glucuronid (TBX) có chứa 5-bromo-4-clo-3-indolyl β-D-glucuronid (BCIG) để phát hiện enzym β-glucuronidaza.
Tiêu chuẩn: TCVN 7924-2: 2008 – Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi – Phương pháp định lượng Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza – Phần 2: Kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở 44 oC sử dụng 5-bromo-4-clo-3-indolyl β-D-glucuronid
Nguyên tắc:
- Cấy mẫu thử hoặc huyền phù ban đầu lên đĩa Petri chứa môi trường TBX.
- Ủ ở 44 oC trong 18 – 24 giờ.
- Đếm các khuẩn lạc màu xanh đặc trưng là Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza.
- Tính số lượng CFU/ml hoặc CFU/g mẫu thử.
Môi trường:
- Môi trường thạch trypton-mật-glucuronid (TBX):
- Thành phần: casein thủy phân enzym, muối mật No.3, BCIG, dimetyl sulfoxit, thạch, nước.
- Chuẩn bị: hòa tan BCIG trong dung dịch thích hợp, hòa tan các thành phần khác trong nước, khử trùng, điều chỉnh pH, rót vào đĩa Petri.
Thiết bị:
- Thiết bị khử trùng khô hoặc wet.
- Tủ ấm 44 oC.
- Nồi cách thủy 44-47 oC.
- Bình, ống nghiệm, chai.
- Pipet hoặc micropipet.
- Đĩa Petri.
- Máy đo pH.
Cách tiến hành:
- Chuẩn bị mẫu thử theo tiêu chuẩn cụ thể hoặc thỏa thuận giữa các bên.
- Cấy mẫu thử hoặc huyền phù ban đầu lên đĩa Petri chứa môi trường TBX.
- Ủ ở 44 oC trong 18 – 24 giờ.
- Đếm các khuẩn lạc màu xanh đặc trưng.
- Tính số lượng CFU/ml hoặc CFU/g mẫu thử.
Cách tính kết quả:
- Sử dụng công thức (1) để tính số lượng CFU/ml hoặc CFU/g.
- Làm tròn kết quả đến hai chữ số có nghĩa.
- Biểu thị kết quả theo đơn vị CFU/ml hoặc CFU/g.
Trường hợp đặc biệt:
- Có hướng dẫn tính toán cho các trường hợp đặc biệt như số lượng CFU ít, nhiều hơn 300 CFU, v.v.
Báo cáo thử nghiệm:
- Ghi rõ thông tin về mẫu thử, phương pháp lấy mẫu, phương pháp thử, điều kiện thao tác, kết quả thử nghiệm, giới hạn tin cậy.
Tài liệu tham khảo:
- [1] BLAZKO N. Evaluation of the β-glucuronidase substrale 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucuronide in a 24 hour direct plating method for Escherichia cob J. Food Protection, 51. p. 402
- [2] DAUARE J.M. CAMPBELL D.R and JOHNSON R.W Simplified direct plating method for enhanced recovery of Escherichia coli m food. Journal of Food Science 50, 1985, pp. 1736-1737. 1746.
- [3] DELISE G.L. and LEY A. Rapid detection of Escherichia coli in urine samples by a new chromogenic β-glucuronidase assay. J. Clin. Microbiol, 27. 1989, pp. 778-779.
- [4] KILIAN M. and BULOW Ρ. Rapid diagnosis of Enterobacieriaceae. Detection of bacterial glycosidases. Ada Pathol, Microbiol, Scand. Sect. B. 84. 1976. pp. 245-251.
- [5] KILIAN M. and BULOW Ρ. Rapid identification of Enterobacteriaceae. Use of a β-glucuronidase detecting agar medium (PGUA agar) for the
