Một trong những yếu tố quyết định độ chính xác và độ lặp lại của phương pháp phân tích HPLC chính là giai đoạn chuẩn bị trước khi tiêm mẫu. Dù thiết bị có hiện đại đến đâu, nếu pha động hoặc dịch mẫu thử không đạt chuẩn, kết quả phân tích sẽ bị sai lệch nghiêm trọng và dễ gây tắc nghẽn, hư hỏng cột sắc ký.
1. Kỹ thuật chuẩn bị pha động (Mobile Phase) chuẩn phòng thí nghiệm
• Lựa chọn dung môi: Lựa chọn pha động có độ tinh khiết chuẩn HPLC (HPLC Grade), phù hợp với tính phân cực của chất phân tích và khả năng lưu giữ trên cột pha đảo C18.
• Pha dung môi theo đúng tỉ lệ: Kiểm soát kỹ thuật đo thể tích riêng rẽ trước khi trộn để tránh hiện tượng co thể tích của dung môi.
• Lọc và loại khí hòa tan (Degas): Bắt buộc lọc dung môi qua màng lọc micropore kích thước 0.45 µm hoặc 0.22 µm và khử bọt khí bằng bể siêu âm hoặc bộ degassing trực tuyến của máy LC-2030C 3D nhằm bảo vệ bơm cao áp và tránh nhiễu baseline.
2. Chuẩn bị mẫu thử trên các nền mẫu thực tế theo SOP
• Tại khóa đào tạo của Viện, học viên được hướng dẫn chi tiết quy trình xử lý mẫu theo SOP chuẩn: từ các nền mẫu đơn giản đến các nền mẫu phức tạp (như thực phẩm bảo vệ sức khỏe, thực phẩm chức năng, dược liệu, cao chiết…).
• Quy trình chiết tách, loại tạp và làm sạch mẫu giúp bảo vệ cột phân tích không bị nhiễm bẩn không phục hồi.
• Xây dựng dãy dung dịch chuẩn làm việc (Calibration Standards) với nồng độ tuyến tính phù hợp.
3. Kiểm tra độ ổn định của dòng dung môi và đường nền (Baseline)
• Kỹ thuật Purge đường ống để đưa pha động mới vào hệ thống, loại bỏ hoàn toàn bọt khí tích tụ.
• Cho dòng dung môi chạy qua cột C18 để cân bằng hệ thống (Equilibration) ở lưu lượng và nhiệt độ cài đặt.
• Theo dõi tín hiệu Baseline trên đầu dò DAD: Đường nền phẳng, không bị trôi (Drifting) hay dao động sóng (Pumping noise) là điều kiện tiên quyết trước khi bắt đầu tiêm dãy chuẩn và mẫu thử.
